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IPHASE/匯智和源 體外哺乳動物細(xì)胞染色體畸變試驗熱點問題解答【上】

更新時間:2023-11-03      點擊次數(shù):762

體外哺乳動物細(xì)胞染色體畸變試驗常見問題與解答

—熱點問題—


第一題    細(xì)胞被“黑膠蟲"污染了該如何處理?

如果培養(yǎng)的細(xì)胞被“黑膠蟲"污染,需先去評估污染的嚴(yán)重程度。如果污染不嚴(yán)重,可選用市售的“黑膠蟲"清除試劑進(jìn)行處理;如果污染較嚴(yán)重,建議直接丟棄該細(xì)胞,分析造成“黑膠蟲"污染的原因并進(jìn)行治理。


第二題    CHL細(xì)胞為試驗系統(tǒng),細(xì)胞準(zhǔn)備時推薦的接種密度是多大?接種后培養(yǎng)多久可以開始染毒?

本公司使用T25瓶進(jìn)行試驗,接種密度為6~9×10^4/mL,接種量為5mL,即每瓶細(xì)胞量是3×10^5個~4.5×10^5個。一般情況下,接種后24h左右細(xì)胞的融合率可達(dá)到80%即可進(jìn)行染毒,如果融合率不夠,也可以繼續(xù)培養(yǎng)直至滿足試驗需求。


第三題    一般如何確定秋水仙素的濃度和處理時間?。?/span>

秋水仙素劑量大,則作用時間短;秋水仙素劑量小,則適當(dāng)延長作用時間。本公司使用的秋水仙素濃度是1μg/mL,4h。


第四題    秋水仙素工作的機(jī)理是什么?

秋水仙素可以抑制紡錘體的形成,導(dǎo)致紡錘絲無法捕捉到著絲粒而造成染色體不能向細(xì)胞兩極移動。同時,秋水仙素處理后,染色體將會不能排列在赤道板,所以在細(xì)胞中會散亂分布。


第五題    細(xì)胞收集量少是什么原因?qū)е碌??如何?yōu)化?

細(xì)胞收集量少的原因主要有以下幾點:

(1)酶消化過程消化不干凈;

(2)離心速度過低,細(xì)胞不能沉淀,導(dǎo)致細(xì)胞丟失;

(3)鋪板細(xì)胞量不夠;

(4)樣品對細(xì)胞有毒性,細(xì)胞死亡。


優(yōu)化策略:

(1)酶消化過程需于顯微鏡下觀察,確保消化完;

(2)適宜的離心條件,通常250g,5min;

(3)細(xì)胞懸液需混合均勻,必要時多次計數(shù);

(4)如有需求,請于正式試驗前開展預(yù)試驗。


第六題    低滲目的是什么?有什么注意事項?

在低滲環(huán)境中,細(xì)胞易吸水膨脹,染色體鋪展,以便能在一個平面上觀察所有染色體形態(tài),為后續(xù)染色做準(zhǔn)備。在低滲過程中我們需要注意以下幾點:


(1)低滲時間。低滲時間過長,可引起細(xì)胞破裂,染色體丟失;低滲時間不足,細(xì)胞膨脹度不夠,染色體聚集,分散不好,不利于閱片。本公司低滲是使用0.075mol/L的氯化甲溶液37℃水浴30~40min。

(2) 細(xì)胞操作需輕柔。低滲后的細(xì)胞會脹大,通透性增強(qiáng),細(xì)胞操作過程一定要輕柔,以防細(xì)胞破裂。

(3)離心條件需適合。低滲后細(xì)胞膨脹,離心力過高,細(xì)胞容易破裂,導(dǎo)致染色體丟失;離心力過低,細(xì)胞不能沉淀,收集不到細(xì)胞。


第七題    細(xì)胞在固定過程中丟失是什么原因?qū)е碌模?/span>

細(xì)胞在固定過程中丟失可能是因為離心速度過低,細(xì)胞不能沉淀或沉淀不夠,在更換固定液的過程中導(dǎo)致細(xì)胞丟失。


第八題    每次固定的時間是多久?固定幾次比較合適?

本公司使用的是預(yù)固定加重復(fù)固定的方法。預(yù)固定在低滲結(jié)束前進(jìn)行,一般3~5min,步驟雖簡單卻不能省略,可有效預(yù)防細(xì)胞因加入大量的固定液而凝結(jié)成塊。固定步驟共重復(fù)3次,一般30±5min。


第九題    玻片干燥怎么操作?

可于室溫下自然干燥,也可于37℃干燥箱中烘干。


第十題    使用吉姆薩染液同樣條件下染片,為什么會出現(xiàn)有的片子是藍(lán)色的,有的是紅色的?

根本原因是因為染色過程中pH的變化。吉姆薩染液由天青,伊紅組成,所帶電荷隨溶液PH而定。在偏酸性環(huán)境中下在電荷增多易與伊紅結(jié)合染色偏紅;在偏堿性環(huán)境中負(fù)電荷增多,易與美藍(lán)或天青結(jié)合,染色偏藍(lán)。


發(fā)    文    章    得     獎    勵


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非SCI論文及IF≤5分,500元禮品;


5分<IF≤8分 800元;


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